HEMATOLOŠKI STATUS KLJENA LEUCISCUS CEPHALUS (LINNAEUS, 1758.) IZ RIJEKE KRUPICE I ŽELJEZNICE

Transcription

1 HEMATOLOŠKI STATUS KLJENA LEUCISCUS CEPHALUS (LINNAEUS, 1758.) IZ RIJEKE KRUPICE I ŽELJEZNICE HEMATOLOGICAL STATUS OF CHUB FISH LEUCISCUS CEPHALUS (LINNAEUS, 1758.) FROM KRUPICA AND ŽELJEZNICA RIVERS Mitrašinović Maja, Suljević D. Abstract The research comprised 95 individuals Leuciscus cephalus in three different seasons and two different rivers. Analyzed were the hematological parameters in the chub blood samples, and then compared by region and seasons. We analyzed: red cell count, white cell count, hematocrit, hemoglobin, and hematological indices (MCV, MCH and MCHC). Statistical data (Microsoft Excel and SPSS 11.5) showed statistically significant results of the white cell count by region and seasons (0.000), red cell count (0.000), hematocrit (0.00) and hematological indices: MCH (0.000) and MCHC (0.000 ). Key words: chub fish, hematological parameters, erythrocytes, leucocytes, hemoglobin. Kratak sadržaj - Istraživanja su obuhvatila 95 jedinki Leuciscus cephalus u tri različite sezone i dvije različite rijeke. Analizirani su hematološki parametri u krvi kljena i komparirani po lokalitetima i sezonama. Analizirani su: ukupan broj eritrocita i leukocita, hematokrit, hemoglobin i hematološki indeksi (MCV, MCH i MCHC). Statistička obrada podataka (Microsoft Excel i SPSS 11.5) pokazala je statistički značajne rezultate ukupnog broja leukocita po lokalitetima i sezonama (0,000), ukupnog broja eritrocita (0,000), vrijednosti hematokrita (0,00) i hematoloških indeksa: MCH (0,000) i MCHC (0,000). Ključne riječi: kljen, hematološki parametri, eritrociti, leukociti, hemoglobin Mr. sc. Mitrašinović Maja, biolog, viši asistent,: mitrasinovicmaja@gmail.com; Suljević Damir, biolog, asistent Odsjek za biologiju, Prirodno-matematički fakultet, Univerzitet u Sarajevu. Mitrašinović Maja, MSc, Biologist, Senior Assistant; Suljević Damir, Biologist, Assistant; Department of Biology, Faculty of Science, University of Sarajevo Veterinaria 58 (1-2),63-76, Sarajevo

2 64 Uvod Fiziologija pruža podatke značajne kako za taksonomiju tako i za ekologiju riba. Definisanje fizioloških karakteristika vrste omogućava razumijevanje funkcionalnih adaptacija vrste na njenu nišu i posebno je značajno u proučavanju blisko srodnih vrsta, odnosno individua iste vrste u različitim uslovima sredine (16). Podaci o vrijednostima određenih fizioloških parametara date vrste doprinose poznavanju granica variranja ovih parametara u različitim fazama životnog ciklusa, kao i određivanju normalnih vrijednosti, tipičnih za tu vrstu (15). Treba naglasiti da promjene koje se javljaju u krvnoj slici riba pri određenim fiziološkim stanjima mogu biti specifičnog ili nespecifičnog karaktera. Specifične promjene omogućavaju neposrednu dijagnostiku datog fiziološkog ili patofiziološkog stanja u organizmu, dok nespecifične samo ukazuju na postojanje određenih promjena u organizmu (14). Potrebno je istaći da svaka vrsta ima svojstvene karakteristike pojedinih hematoloških parametara, tj. broja i veličine eritrocita, te broja i distribucije leukocita (27, 25). Činjenica da se organske vrste u prirodi održavaju pod stalno promjenjivim uslovima okoliša objašnjava se njihovom fiziološkom prilagodbom na promjene ekoloških faktora. Ovaj tip adaptacija označava se fiziološkim adaptacijama. Klasična Hartova klasifikacija (1962) fizioloških adaptacija je opšte prihvaćena i još i danas važeća (17). Raspon kolebanja jednog ekološkog faktora, u čijim je granicama moguć opstanak određene organske vrste, naziva se njenom ekološkom valencijom. Veličina ekološke valencije za jedan određeni faktor varira od vrste do vrste, a njezine granice mogu biti ili vrlo široke ili vrlo uske (23). Kod riba svaka promjena sredine izaziva i prouzrokuje određeni fiziološki odgovor, kojim se pokušava održati ravnoteža unutar određenih granica, odnosno postići prilagođavanje promjenjivim uslovima ( 21). Promjene kvaliteta vode dovode do značajnih promjena kod riba, što se ogleda u porastu broja i inteziteta bolesti, kao i u samom hematološkom statusu date vrste ribe (1, 29). Dugotrajno izlaganje tako izmijenjenim uslovima dovodi do opadanja odbrambenog imunološkog sistema, kao i povećane osjetljivosti organizama (2, 3, 8). Prisustvo nekog od polutanata u vodi takođe dovodi kod riba do određenih promjena krvi koje se mogu prikazati preko hematološkog statusa (9, 11). Rano otkrivanje prisutnosti polutanta u nekom vodenom ekosistemu može se utvrditi na molekularnoj razini, abnormalnosti tkiva i organa ili omogućuje istraživačima pravovremeno poduzimanje mjera koje će spriječiti daljnju degradaciju organizama i životnih zajednice (5, 4, 30). Povećanje onečišćenja okoliša organizmi uspijevaju savladati bez nekih značajnih metaboličkih oštećenja. Međutim, kod viših koncentracija polutanata velika su biohemijska ili fiziološka oštećenja organizama koja niti jedan mehanizam nije u stanju popraviti. Kod još viših koncentracija dolazi do uginuća organizma (28). Praćenje hematoloških parametara omogućuje brzu detekciju promjena stanja kod riba, jer se narušavanje hematološkog statusa pojavljuje veoma brzo i prethodi promjenama u ponašanju kao i oštećenjima. Brzina toksičnih efekata, uzrokovana teškim metalima povezana je s transportnom

3 funkcijom krvi, pri čemu krv distribuira metale u sve dijelove tijela (10). Kao polazne ciljeve ovoga rada postavili smo utvrđivanje hematološkog statusa kljena na različitim lokalitetima i u različitim sezonama, kao i utjecaj fizičko-hemijskih osobina vode (kvaliteta) na zdravstveno stanje ovih populacija. Materijal i metode Proučavanje hematološkog statusa urađeno je na vrsti Leuciscus cephalus (Linnaeus, 1758.). Prema savremenim shvatanjima vrsta Leuciscus cephalus L. je svrstana u rod Squalius, tako da je njen novi naziv Squalius cephalus (Linnaeus, 1758.) (22). U istraživanjima su obuhvaćene rijeke Krupica i Željeznica. Krupica (N ' 50";E '40") je tekućica sa dužinom vodotoka od 850 metara. Izdašnost izvora Krupice je mjerena u više uzastopnih godina, i u periodu suše i minimalnih vodostaja je izmjerena količina od oko 350 litara u sekundi. Maksimalno izmjereni protok je bio oko 600 litara u sekundi. Mjerenja u septembru godine, uprkos izuzetnoj suši pokazala su protok od oko 400 litara u sekundi. Spada u umjereno termalne i blago mineralizovane vode. Željeznica (N '55"; E '35") nastaje od Hrasničkog i Godinjskog potoka, koji izviru na planini Treskavici (2.088 m), a sastaju se kod sela Turova. Ušće rijeke Željeznice u Bosnu leži nasuprot selu Osijeku, na zapadu Sarajevskog polja. Dužina rijeke Željeznice od izvora do ušća u rijeku Bosnu je 26,9 kilometara. Željeznica čitavim svojim tokom protiče kroz najnaseljenija i industrijski vrlo razvijenu regiju Bosne i Hercegovine - Sarajevsku regiju. Na rijeci se nalazi hidrocentrala Bogatić, s instaliranom snagom od 6,5 MW, koja je sagrađena nekoliko godina poslije kraja Drugog svjetskog rata. Elektroribolov Ribe, korištene u radu, lovljene su pomoću monofaznog elektroagregata snage 1 kw. Ovakav ribolov ne dovodi do uginuća ribe, već do galvanonarkoze, a pokazao se veoma dobrim za hematološka proučavanja, s obzirom da izaziva samo kratkotrajni stres, nakon kojeg se riba brzo oporavlja. Hematološke metode Punkcija srca Uzimanje krvi za hematološke analize vršeno je punktiranjem srca oštrom i širokom sterilnom iglom (1,0 do 1,2 mm). Prilikom uzimanja krvi vršena je dezinfekcija mjesta uboda, a prilikom punktiranja primijenjena su sva pravila sterilnog rada. Nativna krv bez dodatka antikoagulacionog sredstva koristila se za dalju analizu. Određivanje broja eritrocita Određivanje broja eritrocita izršeno je postupkom brojanja u hemocitometru metodom Kekića i Ivanca (20). Ovaj postupak zahtijeva korišćenje melanžera Veterinaria 58 (1-2),63-76, Sarajevo

4 (prilagođene pipete za brojanje eritrocita) i odgovarajućih rastvora za razblaženje i bojenje krvnih ćelija. Broj eritrocita izražen je u terama na litar (10 12 ). Određivanje koncentracije hemoglobina Određivanje koncentracije hemoglobina vršeno je Drabkinovom hemiglobin cijanidskom metodom (7, 18). Korišten je Drabkinov reagens, pomoću kojeg je hemoglobin preveden u hemiglobin-cijanid, čija je ekstinkcija (absorbancija) očitana na kolorimetru pri talasnoj dužini od 546 nm. Određivanje hematokrita Hematokrit je određen centrifugiranjem korištenjem mikrohematokrit centrifuge, pri brzini od obrtaja u minuti. Krv u cjevčice je uzimana u oko 2/3 njene dužine, dok su prije upotrebe cjevčice bile heparinizirane kako bi se izbjegla koagulacija krvi. Da bi se izbjeglo curenje krvi jedna strana cjevčica je zatvorena kitom (26, 12, 13). Hematološki indeksi Srednja vrijednost zapremine eritrocita (MCV) Ova vrijednost se može dobiti pomoću sljedeće formule: Hct MCV = Br. eritrocita / l Rezultat se izražava u femtolitrima (fl). Srednja vrijednost količine hemoglobina u eritrocitu (MCH) Ovaj indeks daje prosječnu količinu hemoglobina u jednom eritrocitu i izražava se u pg. Hb / l MCH = Br. eritrocita / l Srednja vrijednost hemoglobina u litri eritrocita (MCHC) MCHC pokazuje koncentraciju hemoglobina u jednoj litri eritrocita, ili odnos između masene vrijednosti hemoglobina i određene zapremine eritrocita. Ova vrijednost se može dobiti pomoću sljedeće formule: Hb / l MCHC = Hct Statistička obrada podataka Svi rezultati istraživanja su obrađeni metodama deskriptivne i analitičke statistike (24, 6), uz primjenu statističkih programa SPSS 11.5 i Microsoft Excel. Rezultati Fizičko-hemijske karakteristike vode Krupice Rijeka Krupica spada u kalcijum bikarbonatnu vodu, blago kiselu i tvrdu. Ne postoji organsko zagađenje niti povećane količine nutrijensa. Malo povećana količina bakra ne bi se smjela uzimati za ozbiljan nalaz na osnovu samo jedne analize. Postoji smanjena količina rastvorenog kiseonika, a time i zasićenje kiseonikom ove vode kao jedini parametar koji nije u granicama za I klasu (on je u granici predviđenoj za III klasu površinskih voda). 66

5 Fizičko-hemijske karakteristike vode Željeznice Na osnovu sprovedenih fizičko-hemijskih i mikrobioloških istraživanja rijeke Željeznice u periodu od oktobra do marta godine, možemo zaključiti da je voda u rijeci Željeznici (kao većina voda u našoj zemlji) kalcij-bikarbonatna, blago alkalna (u jednom slučaju je čak i kisela). Provodljivost i tvrdoća jako variraju (vjerovatno zbog jakog antropogenog uticaja), ali su i dalje u granicama predviđenim za I ili II klasu (I i V serija, provodljivost veća od 400 μs/cm). Izvori zagađenja atmosfere i površinskih voda su: industrija boja, baterija, aditiva, konzervisanja hrane, olovne cijevi i ispušni gasovi motornih vozila koji sadržavaju proizvode razgradnje tetraetilolova. Praćeni parametri kljena iz rijeke Krupice i Željeznice Istraživanje kljena iz rijeke Krupice i Željeznice obuhvatalo je praćenje osnovnih hematoloških karakteristika: koncentracija hemoglobina, hematokrit, broj eritrocita, prosječna zapremina eritrocita (MCV), srednja vrijednost količine hemoglobina po eritrocitu (MCH), srednja vrijednost količine hemoglobina po litri eritrocita (MCHC) i broj leukocita. Tabela 1. Hematološki parametri kljena iz rijeke Krupice Table 1. Hematological parameters of chub fish from the Krupica river Broj Hb Hct MCV MCH n=42 eritrocita (g/ l) (l/l) (10 12 (fl) (pg) /L) Srednja vrijednost Standardna devijacija MCHC (g/l) Broj leukocita (10 9 /L) 81,58 0,382 1, ,465 61, ,101 4,258 10,45 0,068 2,902 45,896 18,453 50,855 2,016 Kurtozis 2,11 0,230-0,83 1,452 0,478 0,347 1,58 Skjunis 1,40-0,832-0,54 0,106 1,324 1,102 1,53 Minimalna vrijednost Maksimalna vrijednost Koeficijent variranja 66,67 0,208 8, ,571 43, ,682 2, ,34 0,487 19, , , ,077 10,700 12,81 17,83 20,66 16,07 30,24 23,00 47,34 Iz rijeke Krupice analizirane su 42 jedinke kljena, a rezultati istraživanja predstavljeni su u tab. 1. Na osnovu dobivenih vrijednosti mogu se uočiti veoma izražena individualna variranja navedenih parametara, a na što ukazuje visok koeficijent variranja, posebno kada su u pitanju vrijednosti ukupnog broja leukocita i eritrocita. Visok koeficijent variranja hematoloških indeksa posljedica je individualnih vrijednosti broja eritrocita i koncentracije hemoglobina. Veterinaria 58 (1-2),63-76, Sarajevo

6 Tabela 2. Test normaliteta raspodjele hematoloških parametara kljena iz rijeke Krupice Table 2. Normality test distribution of hematological parameters of the chub fish in the Krupica river Shapiro-Wilk Test značajnosti Statistic df Sig. Broj eritrocita Hematokrit Hemoglobin MCV MCH MCHC Broj leukocita Tabela 3. Pregled hematoloških parametara kljena iz rijeke Krupice po sezonama (I-proljeće, IIljeto, III-zima) Table 3. Overview of hematological parameters of the chub fish in the Krupica river by season (Ispring, II- summer, III-winter) Parametri SEZONA Srednja vrijednost Standardna devijacija I 81,12 28,95 Hb (g/ l) II 76,23 4,68 III 81,548 4,452 I 0,295 0,113 Hct (l/l) II 0,391 0,06 III 0,422 0,025 I 1,036 1,628 x Broj eritrocita (10 12 /L) II 1,556 1,193 x III 1,582 1,662 x I 310,05 48,54 MCV (fl) II 281,67 49,23 III 269,34 33,26 I 86,21 14,62 MCH (pg ) II 49,17 3,96 III 51,89 4,11 I 281,39 48,80 MCHC (g/ l) II 198,52 30,85 III 193,95 14,78 I 3,162 4,950 x 10 8 Broj leukocita (10 9 /L ) II 3,150 4,776 x 10 8 III 6,243 2,217 x 10 8 Na osnovu navedenih vrijednosti skjunisa i kurtosisa iz prethodne tabele za svaki od praćenih parametara, te na osnovu provedenog Shapiro-Wilkovog testa normaliteta raspodjele (tab. 2) može se zaključiti da većina parametara ima značajno odstupanje od normalne raspodjele. Prema provedenom testu raspodjele koja ne odstupa od normalne, konstatovana je za vrijednosti MCV. 68

7 Vrijednosti ispitivanih parametara u krvi kljena po sezonama prikazani su u tab. 3. Vrijednosti hematokrita i ukupnog broja eritrocita rastu od proljeća do jeseni, dok su vrijednosti koncentracije hemoglobina niže u ljetnom periodu, a u periodu proljeća i zime se ne mijenjaju. Veoma izražena variranja hematoloških parametara konstatovana su za vrijednosti ukupnog broja leukocita koji bilježe veliki rast u periodu zime. Vrijednosti hematoloških parametara padaju od proljeća do jeseni, a što je razumljivo zbog manjeg broja eritrocita konstatovanog u periodu proljeća. Osnovna statistička obrada hematoloških parametara kljena iz rijeke Željeznice prikazana je u tabeli 4. Tabela 4. Hematološki parametri kljena iz rijeke Željeznice Table 4. Hematological parameters of the chub fish in the Zeljeznica river n=53 Srednja vrijednost Standardna devijacija Hb (g/ l) Hct (l/l) Broj eritrocita (10 12 /L) MCV (fl) MCH (pg) MCHC (g/l) Broj leukocita (10 9 /L) 75,60 0,376 1, ,072 58, ,938 22,23 12,03 0,090 1,918 x ,922 8,118 68,941 6,541 Kurtozis 2,80 0,694-0,72 5,621 2,394 21,970 0,08 Skjunis -1,26 0,17 0,05 1,13-0,11 3,83 0,94 Minimalna vrijednost Maksimalna vrijednost Koeficijent variranja 34,96 0,133 9,600 x ,300 35,136 94,833 1,225 94,36 0,600 1, ,455 79, ,400 37,200 15,91 23,996 14,592 22,884 13,782 31,779 29,430 Tabela 5. Test normaliteta raspodjele hematoloških parametara kljena iz rijeke Željeznice Table 5. Normality test distribution of hematological parameters of the chub fish in the Željeznica river Shapiro-Wilk Test značajnosti Statistic df Sig. Broj eritrocita Hematokrit Hemoglobin MCV MCH MCHC Broj leukocita Vrijednosti hemoglobina u rijeci Željeznici, tokom cijele godine, ispitivane na ukupno 53 jedinke, kretale su se u dijapazonu od 34,96 do 94,36 g/l, a srednja vrijednost Veterinaria 58 (1-2),63-76, Sarajevo

8 je iznosila 75,60 g/l. Najveće vrijednosti su zabilježene u sezoni proljeće (94,36 g/l), a najniže u sezoni ljeto (34,96 g/l). U ovom slučaju također se uočavaju velike razlike pojedinačnih vrijednosti u ukupnom broju leukocita, a što pokazuje veoma visok koeficijent variranja. Provedeni test normaliteta (tab.5) raspodjele po sezonama pokazuje nešto drugačije rezultate, pri čemu je statistički značajno odstupanje od normalne raspodjele konstatovano samo u slučaju broja eritrocita u proljetnom aspektu, kao i u slučaju koncentracije hemoglobina u ljetnom periodu, dok ostali praćeni parametri po sezonama ne pokazuju značajna odstupanja. Tabela 6. Pregled hematoloških parametara kljena iz rijeke Željeznice po sezonama (I-proljeće, IIljeto, III-zima) Table 6. Overview of hematological parameters of the chub fish in the Željeznica river by season (I-spring, II- summer, III-winter) Parametri SEZONA Srednja vrijednost Standardna devijacija Hb (g/ l) Hct (l/l) Broj eritrocita (10 12 /L) MCV (fl) MCH (pg ) MCHC (g/ l) Broj leukocita (10 9 /L ) I 75,32 15,25 II 74,85 12,40 III 76,88 8,15 I 0,349 0,114 II 0,363 0,061 III 0,420 0,09 I 1,315 2,292 II 1,289 1,873 III 1,353 1,652 I 280, ,943 II 287,352 47,129 III 295,72 36,10 I 58,438 10,609 II 59,106 8,680 III 59,05 4,27 I 242, ,245 II 211,366 34,037 III 200,31 28,16 I 2,090 x ,815 II 2,280 x ,719 III 2,265 x ,368 Na osnovu dobivenih vrijednosti za koncentraciju hemoglobina kod jedinki kljena iz rijeke Željeznice (tab. 6) može se konstatovati da nema sezonskih fluktuacija koncentracije hemoglobina. Vrijednosti ukupnog broja leukocita pokazuju značajan rast od proljeća do zime, dok su vrijednosti eritrocita smanjene u ljetnom periodu, a povećane u zimskom. Vrijednosti hematokrita značajnu razliku pokazuju u poređenju proljetnog i zimskog aspekta (p 0,026) i ljetnog i zimskog aspekta (p 0,047), pri čemu su najveće vrijednosti hematokrita konstatovane u zimskom aspektu. 70

9 Vrijednosti ostalih hematoloških parametara ne pokazuju značajne statističke razlike u poređenju po sezonama. Poređenje nalaza u rijekama po sezonama Tabela 7. Pregled hematoloških parametara kljena iz rijeke Željeznice i Krupice po sezonama (Iproljeće, II- ljeto, III-zima) Table 7. Overview of hematological parameters of the chub fish from the Krupica and Željeznica river by season (I-spring, II- summer, III-winter) Parametri SEZONA Krupica Željeznica Srednja vrijednost I 81,12 75,32 Hb (g/ l) II 76,23 74,85 III 81,54 76,88 I 0,295 0,349 Hct (l/l) II 0,391 0,363 III 0,422 0,420 I 1,036 1,315 Broj eritrocita (10 12 /L) II 1,556 1,289 III 1,582 1,353 I 310,05 280,96 MCV (fl) II 281,67 287,35 III 269,34 295,7 I 86,21 58,43 MCH (pg ) II 49,17 59,10 III 51,89 59,05 I 281,39 242,84 MCHC (g/ l) II 198,52 211,36 III 193,95 200,31 I 3,16 20,90 Broj leukocita (10 9 /L ) II 3,15 22,80 III 6,24 22,65 Veterinaria 58 (1-2),63-76, Sarajevo

10 Hemoglobin Leukociti 75,6 81,58 Krupica Željeznica 22,22 4,26 Krupica Željeznica Grafikon 1. Odnos srednjih vrijednosti koncentracije hemoglobina i ukupnih leukocita Graph 1. Relation between mean values of hemoglobin concentration and total white cell count Na grafikonu su predstavljene vrijednosti honcentracije hemoglobina i ukupnog broja leukocita kao najznačajnije razlike među posmatranim parametrima komparirajući oba vodotoka. Jedinke kljena iz Krupice imaju veće vrijednosti hemoglobina, dok jedinke iz Željeznice imaju veoma povećan broja ukupnih leukocita u ukupnom uzorku. Diskusija U tabeli 7. predstavljene su vrijednosti hematoloških istraživanja u krvi kljena tokom sve tri sezone. Koncentracija hemoglobina kretala se u toku cijele godine u dijapazonu od 66,67 do 111,34, a srednja vrijednost je iznosila 81,58 g/l. Najviše pojedinačne vrijednosti su bile zastupljene u proljeće. Ova konstatacija se ne uklapa u istraživanja Kekića (19), jer su kod njegovih istraživanja najniže vrijednosti hemoglobina bile u ljeto. Na osnovu koeficijenta variranja mogu se uočiti velike individualne razlike u broju leukocita. Hematološki parametri kljena iz rijeke Krupice Srednje vrijednosti broja eritrocita pokazuju značajnu razliku proljeće i ljeto (p = 0,000), kao i u proljeće i jesen (p = 0,000), pri čemu je najmanja vrijednost broja eritrocita konstatovana u proljeće. Vrijednosti hematokrita pokazuju značajnu razliku u poređenju vrijednosti iz proljetne i ljetne sezone (p = 0,000), kao i proljetne i zimske (p 0,004). Najmanja vrijednost hematokrita konstatovana u proljeće, a najveća u zimu. Značajna razlika (p 0,004) u vrijednostima koncentracije hemoglobina konstatovana je u poređenju vrijednosti iz proljetnog i ljetnog perioda sa većim proljetnim vrijednostima. Prosječna zapremina eritrocita značajnu razliku pokazuje u poređenju vrijednosti dobijenih u 72

11 proljeće sa vrijednostima iz zimskog perioda (p 0,021). Poređenje vrijednosti MCH pokazuje značajnu razliku između proljetnog i zimskog perioda (p = 0,000) i proljetnog i ljetnog aspekta (p = 0,000) sa najnižom vrijednošću (43, 550 pg) u ljetnom periodu. Vrijednosti MCHC značajnu razliku pokazuju u poređenju s vrijednostima iz proljeća i ljeta (p = 0,000), kao i vrijednosti iz proljeća i zime (p = 0,000), pri čemu su najveće vrijednosti konstatovane u proljetnom periodu. Vrijednosti broja leukocita značajnu razliku (p = 0,000) pokazuju u poređenju s vrijednostima iz proljetnog i zimskog aspekta. Poređenje rijeka u ukupnom uzorku Poređenje hematoloških parametara kljena iz vodotoka Krupica i Željeznica pokazuje postojanje značajnih razlika u vrijednostima koncentracije hemoglobina (p 0,012) i broja leukocita (p= 0,000), pri čemu su veće vrijednosti koncentracije hemoglobina konstatovane kod jedinki iz rijeke Krupice, dok su jedinke iz rijeke Željeznice imale značajno veće vrijednosti broja leukocita. Kod ostalih praćenih hematoloških parametara nisu konstatovane značajne razlike u poređenju s jedinkama iz dva vodotoka. Proljeće Komparacija dobijenih rezultata po sezonskim aspektima pokazuje postojanje značajne razlike u poređenju vrijednosti između dva vodotoka iz sezonskog aspekta. Statistički značajno veće vrijednosti (p= 0,000) broja leukocita konstatovane su kod jedinki kljena iz rijeke Željeznice, a značajno veće vrijednosti (p= 0,001) kod ovih jedinki utvrđene su i u slučaju broja eritrocita. Veće vrijednosti MCH (p= 0,000), u proljetnom aspektu konstatovane su kod jedinki iz rijeke Krupice. Jedinke iz rijeke Krupice imale su i veće vrijednosti koncentracije hemoglobina, sa razlikom blizu granice statističke značajnosti (p 0,053). Ostali praćeni hematološki parametri ne pokazuju značajnu razliku u poređenju navedenih rijeka u proljetnom aspektu. Ljeto Jedinke iz rijeke Krupice imale su značajno veće (p=0,000) vrijednosti broja eritrocita, dok su jedinke iz rijeke Željeznice imale značajno veći broj leukocita (p= 0,000) i vrijednosti MCH (p< 0,010). Ostali parametri ne pokazuju značajne razlike. Zima Jedinke iz rijeke Krupice imale su i značajno veće vrijednosti broja eritrocita (p< 0,001), dok su kod jedinki iz rijeke Željeznice konstatovane značajno veće vrijednosti MCV (p< 0,047), vrijednosti MCH (p=0,000) i broja leukocita (p=0,000). Veterinaria 58 (1-2),63-76, Sarajevo

12 Zaključci Istraživan je hematološki status kljena iz rijeke Krupice i Željeznice 1. Kod kljena iz rijeke Željeznice konstatovan je veći broj leukocita (p=0,000), dok su kod kljena iz rijeke Krupice prisutne veće vrijednosti koncentracije hemoglobina (p 0,012). Kod ostalih praćenih hematoloških parametara (hematokrit, broj eritrocita, prosječna zapremina eritrocita (MCV), srednja vrijednost količine hemoglobina po eritrocitu (MCH) i srednja vrijednost količine hemoglobina po litri eritrocita (MCHC), nisu konstatovane značajne razlike kod kljena iz dva različita vodotoka. 2. Konstatovano je i postojanje sezonskih variranja hematoloških parametara kod proučavanih kljenova iz oba vodotoka. U rijeci Krupici u proljetnom periodu uočene su najmanje vrijednosti hematokrita, koncentracije hemoglobina i vrijednosti broja eritrocita, dok je vrijednost MCHC bila najveća. 3. U rijeci Željeznici kljen ima najveće vrijednosti hematokrita konstatovane u proljetnom periodu. Vrijednosti ostalih hematoloških parametara kljena iz rijeke Željeznice ne pokazuju značajne razlike u poređenju po sezonama. 4. Kada se porede hematološki parametri kljena iz jednog i drugog vodotoka u istoj sezoni, konstatovano je postojanje sezonskih variranja hematoloških parametara kljena iz oba vodotoka. Kod kljena iz rijeke Željeznice u proljeće zabilježene su statistički značajno veće vrijednosti broja leukocita i broja eritrocita. U rijeci Krupici statistički je značajna razlika MCH u proljetnom periodu. 5. U ljetnom periodu komparacija dobijenih rezultata za jedinke kljena iz istraživanih rijeka pokazuju postojanje značajnih razlika u vrijednostima broja leukocita i vrijednosti MCH. Jedinke iz rijeke Krupice u ljetnom periodu imale su značajno veće vrijednosti broja eritrocita. 6. U zimskom periodu vrijednosti broja eritrocita pokazuju statistički značajnu razliku, u poređenju dvije rijeke, pri čemu su veće vrijednosti utvrđene kod jedinki iz rijeke Krupice, dok je kod jedinki iz rijeke Željeznice konstatovana značajno veća vrijednost MCV, MCH i broja leukocita. LITERATURA 1. Amend DF and Smith L. Pathophysiology of infectious hematopoietic necrosis virus disease in rainbow trout (Salmo gairdneri): early changes in blood and aspects of the immune response after injection of IHN virus. Journal of the Fisheries Research Board of Canada. 1974; 27: Anderson DP. Immunological indicators: effects of environmental stress on imune protection and disease outbreaks. American Fisheries Society Symposium. 1990; 8:

13 3. Arkoosh MR, Casillas E., McCain B. and Varanasi U. Suppression of immunological memory in juvenile chinook salmon (Oncorhynchus tsawytscha) from an urban estuary. Fish & Shellfish Immunology. 1991; 1: Barton BA and Iwama GK. Physiological changes in fish from stress in aquaculture with emphasis on the response and effects of corticosteroids. Annual Review of Fish Diseases. 1991; 1: Beitinger TL and McCauley WR. Whole animal physiological processes for the assessment of stress in fishes. Journal of Great Lakes Research. 1990; 16: Blažić RM i Dragović V. Opšta statistika. Osnovi i analiza. Savremena administracija izdavačko-štamparsko-knjižarska radna organizacija, Beograd Blaxhall PC and Daisly KW. Routine hematological methods for use with fish bloоd. J. Fish. Biol. 1973; 5: Cross ML and Mathews RA. Ichthyophthiriasis in carp, Cyprinus carpio L. - fate of parasites in immunized fish. J. Fish diseases. 1992; 15, 6: Durand JD, Unlu E, Doadrio I, Pipoyan S, and Templeton AR. Origin, radiation, dispersion and allopatric hybridization in the chub Leuciscus cephalus.; Proc Biol Sci. 2000; 22; 267 (1453): Fijan N. Zaštita zdravlja riba. Poljoprivredni fakultet u Osijeku Guerriero G. Seasonal steroids variations and maturity stages in the female chub, Leuciscus cephalus L. (Pisces, Cyprinidae). Italian Journal of Zoology Heckner F. Praktikum der mikroskopischen Haematologie. Urban und Schwarzenber, Muenchen, Wien, Baltimore Hasković E, Ivanc A, Mitrašinović M. Autorizovana skripta Uporedna fiziologija životinja i čovjeka, Univerzitet u Sarajevu, Prirodno-matematički fakultet, Odsjek za biologiju Ivanc A, i Jeremić S. Hematološki status u dijagnostici oboljenja riba. U monografiji "Zaštita životne sredine pri intenzivnom gajenju riba", Univerzitet u Novom Sadu, Prirodno-matematički fakultet, Institut za biologiju, Ekološki pokret grada Novog Sada Urednici: Smiljka Šimić i Aleksandar Ivanc, Novi Sad. 1999; Ivanc A, i Miljanović B. Hidroakumulacije, Multidisciplinovani pristup održivom razvoju, Monografija, Prirodno-matematički fakultet Novi Sad, Ministarstvo za zaštitu prirodnih bogatstava i životne sredine, Zavod za zaštitu zdravlja "Timok" Zaječar, JVP "Vode Srbije", JVP "Vode Vojvodine" Novi Sad Ivanc A, Hasković E, Jeremić S, Dekić R. Hematological Evaluation of welfare and health of fish. Praxis veterinaria. 2005; 53 (3) Ivanc A, Hasković E, Dekić R, Sarić M. Mehanizmi fizioloških adaptacija. Prvi simpozijum biologa Republike Srpske. Banjaluka, Novembar Knjiga plenarnih referata i saopštenja. 2006; Veterinaria 58 (1-2),63-76, Sarajevo

14 18. Ivanc A, Hasković E, Mitrašinović M. Autorizovana skripta Opšta fiziologija životinja i čovjeka, Univerzitet u Sarajevu, Prirodno-matematički fakultet, Odsjek za biologiju; WUS Austria Kekić H. Sezonske oscilacije broja eritrocita i koncentracije hemoglobina u krvi klena (Leuciscus cephalus L.) iz srednjeg toka rijeke Željeznice Kekić H, i Ivanc A. A new direct method for counting fish blood cells. Ichtyologia. 1972; 14, 1: Kirin D. Ecological Study of the Intestinal Helminth Communities of Leuciscus cephalus (L., 1758) and Appraisal of the Conditions of the Studied Freshwater Ecosystems from the Chepelarska River, Bulgaria. Acta zool. bulg. 2002; 54 (2), Lelo S. Fauna Bosne i Hercegovine, Biosistematski pregledi, Udruženje za inventarizaciju i zaštitu životinja Ilijaš, Kanton Sarajevo, Federacija Bosne i Hercegovine, Bosna i Hercegovina Maguran A. Ecological diversity and its measurement. Princeton, Princeton University. 1988; Press, 189p. 24. Petz B. Osnovne statističke metode. Izdavački zavod JAZU, Zagreb Rambhaskar B, & Srinivasa RK. Comparative haematology of ten species of marine fish from Visakhapatnam coast. J. Fish. Biol. 1987; 30: Richterich R. Klinische Chemie. S. Karger, Basel-Muenchen-Paris-London-New York-Sydney Romestand B, Halsband E, Bragoni G, Knežević B, Marić D, & Prochnow F. Etude hematologique comparé des constantes erythrocytaires de quelques poissons marins et d'eaux douces. Rev. Trav. Inst. Pech. marit. 1983; 46: Yilmaz F, Ozdemir N, Demirak A, and Levent TA. Heavy matal levels in two fish species Leuciscus cephalus and Lepomis gibbosus Wedemeyer GA. Physiology of fish in intensive culture system. International Thomson Publishing, Japan Witeska M. Stress in fish-hematological and immunological effects of heavy metals, Electronic Journal of Ichthyology. 2005;1: Uredništvo primilo rukopis