ISO 707/IDF 50: 2008 Mleko i proizvodi od mleka Vodič o uzorkovanju Definisana procedura Reprezentativni uzorak Ne narušiti integritet uzorka Specifičnost SIR! Nesigurnost uzorkovanja heterogenost uzorka, veličina uzorka i metod uzorkovanja
ISO 707/IDF 50: 2008 Autorizovana osoba, obučena Uzorci zapečaćeni sa oznakom: identifikacija, priroda proizvoda, identifikacioni broj, ime i potpis uzorkovača Ukoliko je neopodno: svrha uzorkovanja, masa (volumen), karakteristike proizvoda i uslovi čuvanja u momentu uzorkovanja Uzorci u duplikatu, ili više...
IZVEŠTAJ O UZORKOVANJU Mesto, datum i vreme uzorkovanja Ime i potpis osobe-uzorkovača, ali i prisutnih svedoka Metod uzorkovanja, uz pripremu uzorka i navedene tehnike homogenizacije Priroda i broj jedinica koje predstavljaju pošiljku, uz oznaku šarže, serije ili lota Ukoliko je neophodno i mesto gde se uzorak šalje Ukoliko je moguće, ime i adresa proizvođača i osobe odgovorne za pakovanje ALI I OSTALI RELEVANTNI PODACI: uslovi okruženja, temperatura i vlažnost, metod sterilizacije opreme za uzorkovanje, podatak o tome da li je korišćen konzervans, ili specifična informacija (poteškoće u postizavanju homogenosti proizvoda)
OPREMA ZA UZORKOVANJE Od nerđajućeg čelika, stakla, plastičnog materijala (polipropilen) takvog sastava da ne dovodi do promene uzorka što bi uticalo na rezultate ispitivanja Površine glatke, bez pukotina MIKROBIOLOŠKA ISPITIVANJA Čista i sterilisana (metode sterilizacije?) / izložiti plamenu; potapanje u 70% etanol i sušenje 5 minuta; 96% etanol KONZERVISANJE NE! Osim...
ČUVANJE I TRANSPORT UZORKA Na način da se osigura nepromenjivost uzorka, na odgovarajućoj T, i u što kraćem vremenu dostaviti laboratoriji (u toku 24h) Temperatura - 1-5 o C (osim kod sterilizovanog mleka u originalnom pakovanju, evaporisano mleko, zaslađeno kondenzovano mleko, koncentrati mleka, sušeno mleko i proizvodi od sušenog mleka Po dostavljanju u laboratoriju, odmah započeti analizu
Priprema namirnica za mikrobiološko ispitivanje Pripremanje uzoraka za ispitivanje, početne suspenzije i decimalnih razblaženja za mikrobiološko ispitivanje SRPS EN ISO 6887-1: 2008 Opšta pravila za pripremanje početne suspenzije i decimalnih razblaženja. Zbog velike raznovrsnosti hrane ova horizontalna metoda ne mora u svakoj pojedinosti da odgovara za određene proizvode metode specifične za proizvode
Početna suspenzija (osnovno razblaženje) Suspenzija,rastvor, ili emulzija dobijena pošto se izmerena količina proizvoda, koji se ispituje, izmeša sa devetostrukom količinom sredstva za razblaživanje. 20 ml/g u 180 ml 10 ml/g u 90 ml 1 ml/g u 9 ml
Sredstva za razblaživanje Peptonski slani rastvor Sastav: proizvod enzimskog razlaganja kazeina 1,0 g NaCl 8,5 g voda 1000 ml Puferisana peptonska voda Sastav: Proizvod razlaganja životinjskog tkiva 10,0 g NaCl 5,0 g Dinatrijum-hidrogen fosfat-dodekahidrat (Na 2 HPO 4 *12H 2 0) 9,0 g Kalijum-dihidrogen-fosfat (KH 2 PO 4 ) 1,5 g voda 1000 ml
Temperatura sredstva za razblaživanje treba da bude približno ista kao i temperatura okoline da bi se izbeglo oštećenje mikroorganizama Priprema početne suspenzije ravnomerna raspodela mikroorganizama, koji se nalaze u delu uzorka za ispitivanje
Dalja decimalna razblaženja Suspenzije,ili rastvori dobijeni mešanjem izmerene zapremine početne suspenzije sa devetostrukom zapreminom sredstva za razblaživanje i ponavljanjem ove operacije sa daljim razblaženjima sve dok se ne dobije niz decimalnih razblaženja podesan za inokulaciju podloga
Princip: Decimalna razblaženja da bi se smanjio broj mikroorganizama po jedinici zapremine,što posle inkubacije omogućava: posmatranje rasta (epruvete,boce) brojanje kolonija (ploče)
Homogenizacija uzorka - Tarionik i tučak: uzorak se homogenizuje u tarioniku, a u Erlenmajeru se priprema osnovno razređenje mućkanjem ili vibriranjem u toku 15 minuta Stomaher: osnovno razređenje se priprema homogenizovanjem uzorka u sterilnoj stomaher kesi u trajanju 1-2 min.
Priprema serije razređenja 9 ml FR, PPS, 2% Nacitrat 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 10-1 9 ml FR / PPS / 2% Na-citrat Osnovno razblaženje 20 g uzorka + 180 ml FR / PPS / 2% Na-citrat FR fiziološki rastvor PPS pepton Physiological Salt Solution (pepton 1g, NaCl 8,5 g, dest. voda 1000 ml)